Ocena cytotoksyczności i integralności błony w wycinkach płuc za pomocą testu dehydrogenazy mleczanowej

Zacznij od precyzyjnie wyciętych ludzkich wycinków płuc, PCLS, potraktowanych środkami cytotoksycznymi, takimi jak cząsteczki środków powierzchniowo czynnych, na płytce wielodołkowej.

Środek powierzchniowo czynny wprowadza się do dwuwarstwy lipidowej komórki, powodując interakcję hydrofobowych ogonów środka powierzchniowo czynnego z hydrofobowym rdzeniem dwuwarstwy lipidowej.

W konsekwencji uporządkowane ułożenie cząsteczek lipidów zostaje zaburzone, co prowadzi do powstania miceli.

Narusza to integralność błony, powodując wyciek zawartości wewnątrzkomórkowej, w tym dehydrogenazy mleczanowej lub LDH, powszechnego wskaźnika uszkodzenia błony komórkowej.

Zebrać supernatant zawierający uwolniony LDH.

Dodać koktajl reakcyjny testu LDH zawierający substrat mleczanowy, NAD+, diaforazę i sól tetrazolową i inkubować.

LDH utlenia mleczan do pirogronianu, przy jednoczesnej redukcji koenzymu NAD+ do NADH.

Diaphoraze wykorzystuje NADH do redukcji soli tetrazolowej do formazanu - kolorowego produktu.

Cytotoksyczność wywołaną środkami powierzchniowo czynnymi można zmierzyć na podstawie aktywności LDH wskazanej przez produkcję formazanu.

Po inkubacji PCLS z czynnikami testowymi lub bez nich, prze