$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Weź paramagnetyczny roztwór gadolinu reagujący na zewnętrzne pola magnetyczne.
Wprowadzić znakowane fluorescencyjnie próbki krwi z dodatnim czynnikiem Rh lub czynnikiem Rh i nieznakowanymi próbkami krwi z ujemnym czynnikiem Rh.
Dodaj kulki polimerowe o niskiej gęstości pokryte przeciwciałem anty-RhD i niepowlekane kulki o dużej gęstości.
Przeciwciała anty-RhD wiążą się z antygenami RhD na Rh-dodatnich krwinkach czerwonych, tworząc kompleksy kulkowe-RBC.
Teraz załaduj próbkę do rurki kapilarnej i zamknij ją. Umieść rurkę między magnesami w urządzeniu do lewitacji magnetycznej.
W polu magnetycznym generowanym przez magnesy o podobnych biegunach, roztwór paramagnetyczny wywiera siły magnetyczne i wyporowe na składniki próbki, powodując ich lewitację na wysokościach proporcjonalnych do ich gęstości.
Koraliki o małej i dużej gęstości lewitują odpowiednio na górze i na dole kapilary, ustanawiając odniesienia do wysokości gęstości.
Komórki krwi, będąc diamagnetycznymi, są odpychane przez silne pole magnetyczne w pobliżu magnesów i lewitują w pozycji pośredniej.
Kompleksy koralik-RBC lewitują między kulkami o niskiej gęstości a krwinkami czerwonymi, a komórki fluorescencyjne w tej warstwie potwierdzają obecność krwinek czerwonych czerwono-dodatnich.
Aby rozpocząć, użyj nakłuwacza jednym kliknięciem, aby nakłuć palec dawcy krwi z dodatnim czynnikiem Rh i zebrać 10 mikrolitrów krwi w 1 mililitrze DPBS. Dodaj 1 mikrolitr barwnika fluorescencyjnego w 1-mililitrowej zawiesinie komórek dodatnich względem czynnika Rh, aby fluorescencyjnie zabarwić błonę plazmatyczną i inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 15 minut. Osadzaj komórki, wirując z prędkością 5,600 razy g przez 15 sekund i umyj granulkę trzy razy, używając 1 mililitra DPBS. Zawiesić osad w 1 mililitrze HBSS z wapniem i magnezem. Użyj nakłuwacza jednym kliknięciem, aby nakłuć palec dawcy krwi z ujemnym czynnikiem Rh i pobrać dwa mikrolitry krwi.
Aby przygotować probówkę eksperymentalną zawierającą tylko koraliki, dodaj 174 mikrolitry HBSS z wapniem i magnezem, 1 mikrolitr kulek kontrolnych IgG, 1 mikrolitr ciężkich kulek o gęstości 1,2 grama na mililitr i 24 mikrolitry 500 milimolowego gadolinu.
Aby przygotować eksperymentalną probówkę kontrolną zawierającą IgG, dodaj 172 mikrolitry HBSS z wapniem i magnezem, 1 mikrolitr kulek kontrolnych IgG, 1 mikrolitr ciężkich kulek, 1 mikrolitr krwi ujemnej pod względem czynnika Rh, 1 mikrolitr barwionej zawiesiny krwi z dodatnim czynnikiem Rh i 24 mikrolitry 500 milimolowego gadolinu.
Aby przygotować próbkę probówki eksperymentalnej, dodaj 172 mikrolitry HBSS z wapniem i magnezem 1 mikrolitr kulek powlekanych anty-RhD, 1 mikrolitr ciężkich kulek, 1 mikrolitr krwi ujemnej pod względem czynnika Rh, 1 mikrolitr barwionej zawiesiny krwi dodatniej pod względem czynnika Rh i 24 mikrolitry 500 milimolowego gadolinu. Ustaw urządzenie do lewitacji magnetycznej i załaduj 50 mikrolitrów próbki do rurki kapilarnej, aż probówka zostanie napełniona.
Uszczelnij końce rurki kapilarnej uszczelniaczem kapilarnym, upewniając się, że nie ma pęcherzyków. Umieść rurkę kapilarną w uchwycie kapilary między górnym i dolnym magnesem. Dostosuj scenę i ostrość, aby uzyskać optymalne oglądanie. Odczekaj około 5 do 20 minut, aż komórki i kulki osiądą w pozycji równowagi magnetycznej.