JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 2:40 min • July 8th, 2025
Zacznij od dodania immunomodulującego środka farmakologicznego do niedojrzałych komórek dendrytycznych lub DC.
DC wyrażają główny kompleks zgodności tkankowej lub cząsteczkę MHC klasy II i cząsteczki kostymulujące, kluczowe dla promowania proliferacji limfocytów T podczas odpowiedzi immunologicznej.
Czynnik immunomodulujący angażuje się w DC i wyzwala regulację w dół ekspresji MHC klasy II i cząsteczek kostymulujących, przekształcając w ten sposób DC w tolerogenną komórkę dendrytyczną lub TolDC.
Wspólna hodowla TolDC z naiwnymi limfocytami T CD4 +.
Dodaj peptyd antygenowy do kokultury.
TolDC internalizują peptyd, a następnie przetwarzają i ładują powstały antygen na cząsteczkę MHC.
Cząsteczka MHC związana z antygenem przemieszcza się do błony komórkowej.
Naiwne limfocyty T CD4 + oddziałują bezpośrednio z kompleksem antygen-MHC na TolDC.
Interakcja z cząsteczką kostymulującą na dojrzałym DC umożliwia pełną aktywację naiwnych limfocytów T.
Bez kostymulacji naiwne limfocyty T CD4+ pozostają uśpione i nie mogą zainicjować odpowiedzi immunologicznej przeciwko prezentowanemu antygenowi.
Ponownie zawiesić komórki przy stężeniu 2 x 105 komórek dendrytycznych na mililitr i traktować je odpowiednim eksperymentalnym stężeniem interesującego triterpenoidu przez 1 godzinę w temperaturze 37 stopni Celsjusza.
Podczas ostatniej trzeciej części inkubacji ponownie zawieś limfocyty T w stężeniu 1 x 107 komórek na mililitr i 1 mikromolowym CFSE przez 15 minut w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Następnie umyj komórki PBS i ponownie dostosuj objętość do końcowego stężenia 2 x 106 limfocytów T na mililitr.
Współhodowla 100 mikrolitrów traktowanych komórek dendrytycznych ze 100 mikrolitrami komórek T CD4 CD4-dodatnich znakowanych CFSE w każdym dołku 96-dołkowej płytki i dodanie 100 nanogramów na mililitr peptydu OVA 322-329 do komórek, mierząc intensywność CFSE limfocytów T za pomocą cytometrii przepływowej po 2 do 3 dniach inkubacji.