JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:34 min. • July 8th, 2025
Weź szkło nakrywkowe z komorą zawierającą komórki tuczne — komórki odpornościowe z granulkami wydzielniczymi lub SG zawierające mediatory stanu zapalnego.
Dodaj przeciwciała IgE wraz z wrażliwym na pH reporterem fluorescencyjnym i inkubuj.
Przeciwciała wiążą się z receptorami Fc na komórkach tucznych. Reportery ulegają internalizacji przez pinocytozę, a powstałe endosomy łączą się z SG.
Wyjmij nośnik. Dodaj antygen zawierający wiele epitopów wiążących IgE; Umieść szkiełko pod mikroskopem fluorescencyjnym i zastosuj wymaganą długość fali wzbudzenia.
Kwaśne pH SG tłumi fluorescencję reporterową.
Antygen wiąże się z kompleksami receptorów IgE na powierzchni komórki, sieciując je.
Agregacja receptorów za pośrednictwem antygenu wyzwala SG do migracji w kierunku błony plazmatycznej.
Białka SNARE na błonie plazmy i SG pośredniczą w fuzji błonowej i rozładowywaniu ładunku SG, zwanym egzocytozą.
Wyższe pH pożywki powoduje alkalizację SG, indukując reportery do odzyskania fluorescencji.
Przychodzące SG łączą się z tymi ze stopkami membranowymi. Alkalizacja drugiego SG pośredniczy w odzyskiwaniu fluorescencji, potwierdzając egzocytozę związku.
Dodaj 10 mikrolitrów zawiesiny komórkowej do komo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych