JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:54 min. • July 8th, 2025
Zacznij od pokrycia szkła nakrywkowego biotynylowaną poli-L-lizyną, aby uzyskać powierzchnię bogatą w biotynę.
Następnie wprowadź streptawidynę – białko, które wiąże się z biotyną, tworząc molekularny most dla kolejnych interakcji.
Następnie dodaj biotynylowane peptydy fotoklatkowe związane z głównymi kompleksami zgodności tkankowej - pMHC wraz z cząsteczkami adhezyjnymi.
Biotynylowane ligandy pMHC i cząsteczki adhezyjne oddziałują z określonymi regionami streptawidyny, umożliwiając ich unieruchomienie.
Następnie kilkakrotnie umyj szkło nakrywkowe buforowaną solą fizjologiczną i wprowadź limfocyty T.
Obecność fotoklatki, światłoczułej grupy chemicznej przywiązanej do określonej reszty peptydu, utrudnia spontaniczne wiązanie receptora limfocytów T z peptydem.
W celu kontrolowanej aktywacji limfocytów T należy wystawić peptydy w fotoklatkach na działanie światła ultrafioletowego.
Światło UV zrywa wiązanie chemiczne między kompleksem fotoklatka-peptyd, odsłaniając natywną formę peptydu.
Receptory limfocytów T identyfikują i przyłączają się do odsłoniętych peptydów, podczas gdy integryny wiążą się z cząsteczkami adhezyjnymi, wywołując aktywację limfocytów T.
Rozpocznij od dodania bioty
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych