Metoda lokalizacji immunofluorescencji in vivo do badania biodystrybucji przeciwciał
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:15 min. • July 8th, 2025
Weźmy mysi model raka piersi. Guzy gruczołu sutkowego obejmują komórki rakowe, fibroblasty związane z rakiem, adipocyty, komórki odpornościowe i unaczynienie guza.
Wstrzyknąć dożylnie przeciwciała swoiste dla nowotworu sprzężone z fluoroforem.
Po dotarciu do naczynia krwionośnego guza przeciwciała wiążą się ze specyficznymi dla nowotworu białkami transbłonowymi na śródbłonku naczynia i pobliskich komórkach rakowych.
Chirurgicznie odizolować gruczoł sutkowy i zanurzyć go w pożywce zamrażającej.
Uzyskać krioskwizyty na szkiełku i spłukać buforem w celu usunięcia pożywki zamrażającej.
Napraw sekcje, aby zachować architekturę tkanki. Zastosuj detergent w celu wzmocnienia barwienia immunologicznego i roztwór blokujący, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych.
Wprowadź przeciwciało pierwszorzędowe specyficzne dla cząsteczek adhezyjnych na śródbłonku naczynia krwionośnego oraz przeciwciało drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, które wiąże się z przeciwciałem pierwotnym, znakując naczynia krwionośne.
Nałożyć podłoże mocujące na szkiełko podstawowe i umieścić szkiełko nakrywkowe.
Pod mikroskopem konfokalnym oceń biodystrybucję przeciwciał specyficznych dla nowotworu w i wokół zna
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych