JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:28 min. • July 8th, 2025
Pobrać płytkę wielodołkową zawierającą zawiesinę leukocytów ludzkich. Dodaj znakowane FITC chorobotwórcze zarodniki grzybów.
Podczas inkubacji zarodniki pęcznieją i pękają swoją sztywną hydrofobową warstwę białkową, odsłaniając polisacharydy ściany komórkowej rozpoznawane przez specyficzne receptory rozpoznawania wzorców na komórkach fagocytarnych.
To wiązanie wyzwala wewnątrzkomórkowe szlaki sygnałowe, prowadząc do przegrupowania aktyny i internalizacji zarodników w fagosomach.
W zależności od stanu aktywacji fagocytów, niektóre zarodniki pozostają przyklejone do komórek bez internalizacji.
Po inkubacji zbierz komórki i przenieś je do świeżej probówki.
wirówka. Ponownie zawiesić komórki w buforze i przenieść je na wielodołkową płytkę z dnem w kształcie litery V.
Wprowadź znakowane fluoroforem przeciwciała anty-FITC, które wiążą się z odsłoniętymi cząsteczkami FITC na przylegających zarodnikach, przeciwdziałając ich barwieniu.
wirówka. Ponownie zawiesić komórki w buforze i przenieść je do probówek cytometru przepływowego.
Wykonaj cytometrię przepływową, aby odróżnić zarodniki zinternalizowane od przylegających do komórek.
Fagocyty zawierające zinternalizowane zarodniki wykazują syg
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych