JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:34 min. • July 8th, 2025
Weź wielodołkową płytkę zawierającą przylegające komórki kostniakomięsaka na szkiełkach nakrywkowych.
Te komórki raka kości są wstępnie traktowane substancją chemiczną wywołującą stres, co powoduje tworzenie się granulek stresu.
Granulki stresu to cytoplazmatyczne organelle bez błony zawierające nietranslujące mRNA, małe podjednostki rybosomalne, białka wiążące RNA lub RBP, czynniki związane z translacją i białka sygnałowe.
Wyrzucić pożywkę i umyć komórki buforem. Napraw komórki, aby zachować morfologię komórkową.
Przepuszczalność komórek w celu uzyskania dostępu do celów wewnątrzkomórkowych. Dodaj białka blokujące, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych.
Wprowadź przeciwciała pierwszorzędowe, które wiążą się ze specyficznymi RBP i czynnikami związanymi z translacją w ziarnistościach stresu.
Inkubować z różnymi przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi fluoroforem i barwnikiem Hoechsta.
Przeciwciała drugorzędowe wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi związanymi z białkami związanymi z ziarnistościami stresu, podczas gdy cząsteczki Hoechst barwią DNA.
Zamontuj szkiełka nakrywkowe zawierające komórki za pomocą nośnika montażowego.
Za pomocą mikroskopu fluorescencyjn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych