JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:59 min. • July 8th, 2025
Zacznij od probówek zawierających ludzką krew pełną, w tym czerwone krwinki lub RBC i białe krwinki lub WBC, takie jak monocyty i granulocyty oraz inne komórki krwi.
Wprowadzić dihydroetydydę — wskaźnik ponadtlenkowy i nieznakowane bakterie do jednej probówki. Potraktuj drugą probówkę zielonymi bakteriami znakowanymi fluoroforem.
Granulocyty i monocyty oddziałują z cząsteczkami bakterii związanymi z patogenami, pochłaniając je w fagosomach.
To aktywuje enzym błony fagosomalnej oksydazę NADPH, redukując tlen cząsteczkowy do anionu ponadtlenkowego.
Anion ponadtlenkowy wytwarza dalej nadtlenek wodoru - reaktywną formę tlenu lub ROS, co powoduje wybuch oksydacyjny.
W fagosomie ROS utlenia dihydroetydydę, tworząc 2-hydroksyetydy, która barwi DNA bakterii, nadając czerwoną fluorescencję.
Wprowadź wygaszacz, aby wygasić fluorescencję zewnątrzkomórkową.
Dodaj roztwór lizujący, eliminując potencjalne zakłócenia RBC, i napraw WBC.
W cytometrii przepływowej komórki z zieloną fluorescencją potwierdzają aktywność fagocytarną granulocytów i monocytów, podczas gdy komórki z czerwoną fluorescencją w innej probówce wskazują na aktywność tlenową w tych komórkach.
Przed przystąpieniem do zabiegu nale
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych