Kwantyfikacja poziomów mediatorów immunologicznych w płynie z błony śluzowej człowieka

Rozmrozić bibuły filtracyjne zawierające wchłonięty płyn z błony śluzowej nosa na lodzie, aby zapobiec degradacji próbki.

Płyn składa się z mediatorów immunologicznych, w tym chemokin i cytokin.

Zanurz bibuły filtracyjne w buforze. Przenieść zawartość do filtrów probówkowych. Odwirować w celu wymycia płynu wyściełającego błonę śluzową z bibuły filtracyjnej.

Dodaj przefiltrowany ekstrakt z nosa do płytki testowej z wzorem szeregu przeciwciał wychwytujących specyficznych dla mediatora.

Mediatory immunologiczne wiążą się z odpowiadającymi im przeciwciałami.

Wprowadź przeciwciała detekcyjne znakowane kompleksem rutenu, które wiążą się z odpowiednimi mediatorami.

Dodaj bufor na bazie trisu zawierający tripropyloaminę lub TPA.

Kiedy potencjał jest przyłożony do elektrod, kompleks rutenu i TPA ulegają utlenianiu.

Powstały rodnik TPA wzbudza kompleks rutenu.

Po powrocie do stanu podstawowego kompleks rutenu emituje fotony.

Zmierzone natężenie światła jest proporcjonalne do stężenia specyficznego mediatora immunologicznego w płynie błony śluzowej.

W celu ilościowego określenia mediatora immunologicznego dróg oddechowych należy umieścić na lodzie do 10 próbek z ujemnej temperatury 80 stopni