Test in vitro do badania cytotoksyczności wstępnie aktywowanych limfocytów T CD8 + wobec komórek rakowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:04 min. • July 8th, 2025
Weźmy dwie populacje limfocytów T CD8 +: efektorowe limfocyty T CD8 + wstępnie aktywowane przez zaangażowanie limfocytów T i receptorów kostymulujących za pośrednictwem przeciwciał oraz stłumione limfocyty T CD8 + hamowane przez komórki supresorowe pochodzące z mieloidu.
Dodaj te limfocyty T do studzienek pokrytych błoną podstawną z komórkami rakowymi wyrażającymi białko fluorescencyjne o ograniczonym jądrze.
Pipetować fluorogenny substrat kaspazy-3 — barwnik fluorogenny wiążący DNA, sprzężony z peptydem zawierającym miejsce rozpoznawania kaspazy-3.
Inkubować. Receptory efektorowych limfocytów T wiążą się z kompleksem peptydowym MHC klasy I na komórkach nowotworowych, wywołując uwalnianie cytotoksycznych granulek zawierających perforyny i granzymy.
Perforyny tworzą pory błony komórkowej raka, umożliwiając wnikanie granzymu i aktywację kaspazy, inicjując apoptozę.
Aktywowane kaspazy dodatkowo rozszczepiają fluorogenny substrat kaspazy, uwalniając barwnik, który wiąże się z DNA i fluoryzuje.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym komórki rakowe hodowane wspólnie z efektorowymi limfocytami T wykazują podwójną fluorescencję jądrową, co wskazuje na apoptozę komórek rakowych.
W przeciwieństwie
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych