Test do wykrywania produkcji reaktywnych form tlenu w tkankach ryżowych po wywołaniu immunologicznym
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:42 min. • July 8th, 2025
Pobrać mikropłytkę zawierającą jednolite segmenty pochewki wycięte z sadzonek ryżu i krążki liściowe uzyskane z liści rośliny ryżu.
Dodaj sterylną wodę i inkubuj przez noc, aby umożliwić regenerację po naprężeniu rany.
Dodaj immunogenny peptyd pochodzący z wici bakteryjnej, który działa jak wzór molekularny związany z patogenem lub PAMP.
Komórki roślinne na krawędziach cięcia wiążą się z PAMP za pośrednictwem receptorów rozpoznawania wzorców.
Wiązanie wyzwala sygnalizację w dół, aktywując enzym zlokalizowany w błonie plazmatycznej, zwany homologiem oksydazy wybuchowej układu oddechowego lub RBOH.
Aktywowany RBOH wytwarza reaktywne formy tlenu lub ROS w apoplastach - przestrzeni międzykomórkowej. Wytworzony ROS jest przekształcany w nadtlenek wodoru.
Dodaj enzym peroksydazę i podłoże chemiluminescencyjne.
Peroksydaza wykorzystuje nadtlenek wodoru do przekształcenia substratu w pośredni stan wzbudzony, który uwalnia energię w postaci światła i powraca do stanu podstawowego.
Zmierz luminescencję w obu typach tkanek, aby wykryć gwałtowny wzrost natychmiast po leczeniu PAMP, wskazujący na wybuch ROS.
Pochewkę z 10-dniowych sadzonek ryżu należy przeciąć na 3-milimetrowe segmenty za pomoc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych