Test do badań przesiewowych bioaktywnych nanocząstek pod kątem hamowania sygnalizacji receptora toll-podobnego

Weźmy płytkę wielodołkową z różnymi makrofagami reporterowymi, w których znajduje się wydzielany gen embrionalnej fosfatazy alkalicznej lub gen SEAP lub wydzielany gen lucyferazy pod indukowalnymi promotorami.

Dodaj pożywki zawierające różne hybrydy nanocząstek peptydu i złota zmieszane z lipopolisacharydami lub LPS do wyznaczonych studzienek.

LPS wiąże się z receptorami toll-podobnymi makrofagów lub TLR, wywołując internalizację do endosomu.

Endosomalna pompa protonowa transportuje protony do środka. Zakwaszenie wyzwala sygnalizację TLR, aktywując czynniki transkrypcyjne.

Czynniki te indukują ekspresję genów reporterowych, wytwarzając SEAP lub lucyferazę.

Alternatywnie, internalizacja LPS wraz z hybrydami powoduje, że ujemnie naładowane grupy peptydowe sekwestrują protony luminalne, zapobiegając zakwaszeniu endosomalny i hamując sygnalizację TLR.

Zebrać pożywkę, odwirować w celu oddzielenia supernatantu i dodać substraty do SEAP i lucyferazy.

SEAP przekształca swój substrat w kolorowy produkt, podczas gdy lucyferazy katalizuje swój substrat w celu wytworzenia luminescencji.

Zmniejszenie liczby sygnałów reporterowych wskazuje na skuteczność hybryd w hamowaniu sygnalizacji TLR.

Odwi