JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:23 min. • July 8th, 2025
Pobrać płytkę wielodołkową zawierającą monowarstwę komórek ssaków.
Zaszczepić studzienki seryjnymi rozcieńczeniami homogenatów tkankowych zawierających wirusa Zika, pochodzących z różnych narządów zakażonej myszy.
Po dostaniu się do komórek poprzez endocytozę wirus namnaża się i pączkuje, aby zainfekować sąsiednie komórki.
Nakład z roztworem metylocelulozy o wysokiej lepkości, tworząc fizyczną barierę ograniczającą przemieszczanie się wirusa.
Bariera pozwala na infekcję tylko bezpośrednio sąsiadujących komórek, tworząc ogniska zainfekowanych komórek i zapewnia, że każde ognisko pochodzi z pojedynczej cząsteczki wirusa, umożliwiając dokładną kwantyfikację.
Napraw komórki i przepuszczalność błony. Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe, które dostają się do komórek i wchodzą w interakcję z antygenem wirusowym.
Wprowadzić przeciwciało drugorzędowe sprzężone z peroksydazą, które wiąże się z przeciwciałem pierwszorzędowym.
Dodaj chromogenny substrat, który jest przekształcany przez peroksydazę, tworząc kolorowe plamy, wskazujące ogniska zainfekowanych komórek.
Policz ogniska, aby określić ilościowo miano wirusa w różnych narządach myszy.
Wyjmij homogenizowane próbki z zamrażarki o temperatu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych