JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 2:49 min • July 8th, 2025
Weź mysią zawiesinę kałową zawierającą bakterie kwasu mlekowego lub LAB, które wytwarzają bakteriocynę, peptyd przeciwdrobnoustrojowy, i zaszczepij we wstępnie podgrzanym, selektywnym miękkim podłożu agarowym LAB.
Wlej pożywkę do płytki agarowej, tworząc pierwszą warstwę.
Nałożyć drugą warstwę agaru i inkubować.
Pierwsza warstwa selektywnie wspomaga wzrost LAB, umożliwiając wydzielanym cząsteczkom bakteriocyny dyfuzję na zewnątrz z kolonii do otaczającego podłoża.
Druga warstwa zawiera pożywkę bezkomórkową, która umożliwia dyfuzję bakteriocyny i zapobiega wzrostowi kolonii LAB na powierzchni.
Teraz wlej trzecią warstwę agaru zawierającą szczep wrażliwy na bakteriocynę.
Bakterie rosnące w trzeciej warstwie napotykają bakteriocynę dyfundującą z niższych warstw.
Bakteriocyna narusza błonę komórkową wrażliwych bakterii, zaburzając homeostazę komórkową i powodując śmierć komórki, widoczną jako wyraźna strefa na trzeciej warstwie.
Zmierz średnicę strefy, aby ocenić siłę działania bakteriocyny.
Aby policzyć komórki bakteryjne wytwarzające bakteriocynę w próbkach kału, przenieś rozcieńczone komórki producenta bakteriocyny do 4 mililitrów wstępnie ogrzanego miękkiego agaru MRS. Wymieszaj agar przez wirowanie i wylej komórki na płytkę z agarem MRS 1,5%. Ta warstwa jest określana jako pierwsza warstwa.
Przenieś kolejne 4 mililitry bezkomórkowego miękkiego agaru 0,8% MRS na pierwszą warstwę, aby osadzić wszystkie komórki w miękkim agarze. Warstwa ta ma na celu zapobieganie wzrostowi komórek jako kolonii na powierzchni płytek agarowych.
W sterylnym kapturze wysusz płytki, zdejmując pokrywkę na pięć do 10 minut przed inkubacją płytek w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez 20 do 24 godzin w celu wzrostu komórek i utworzenia kolonii.
Aby zidentyfikować kolonie wytwarzające bakteriocynę, wymieszaj 40 mikrolitrów nocnej kultury odpowiedniego szczepu wskaźnikowego z 4 mililitrami wstępnie podgrzanego miękkiego agaru na każdą płytkę. Wlej mieszaninę na talerze. Ta warstwa jest określana jako trzecia warstwa.
Wysuszyć i inkubować płytki jak poprzednio, w celu wzrostu komórek i utworzenia kolonii. Kolonie wytwarzające bakteriocynę mają wyraźne strefy zahamowania wokół kolonii.
Niniejsze badanie analizuje produkcję bakteriocyn przez bakterie kwasu mlekowego (LAB) wyizolowane z próbek kału myszy. Metodologia obejmuje nakładanie warstw agaru w celu oceny aktywności bakteriocyn oraz identyfikacji kolonii produkujących bakteriocyny.
Ilościowa ocena bakterii kwasu mlekowego produkujących bakteriocyny z próbek kału mysiego umożliwia wczesną ewaluację kandydatów na środki przeciwdrobnoustrojowe. Ten test z użyciem warstwowego agaru zapewnia powtarzalną platformę do badania aktywności peptydów pochodzenia mikrobiologicznego, wspierając pewność prognostyczną w walidacji celów i minimalizacji ryzyka mechanistycznego. Podejście to ułatwia selekcję portfolio poprzez wyodrębnienie silnych producentów substancji przeciwdrobnoustrojowych do dalszych badań translacyjnych.
Analiza ta wpisuje się w proces od odkrycia do badań przedklinicznych, umożliwiając wczesną identyfikację oraz ilościową klasyfikację szczepów produkujących bakteriocyny w celu ich dalszej charakterystyki.
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026