Ocena potencjału przeciwdrobnoustrojowego mysich bakterii kałowych wytwarzających bakteriocynę

0 wyświetleń2:49 min • July 8th, 2025

Weź mysią zawiesinę kałową zawierającą bakterie kwasu mlekowego lub LAB, które wytwarzają bakteriocynę, peptyd przeciwdrobnoustrojowy, i zaszczepij we wstępnie podgrzanym, selektywnym miękkim podłożu agarowym LAB.

Wlej pożywkę do płytki agarowej, tworząc pierwszą warstwę.

Nałożyć drugą warstwę agaru i inkubować.

Pierwsza warstwa selektywnie wspomaga wzrost LAB, umożliwiając wydzielanym cząsteczkom bakteriocyny dyfuzję na zewnątrz z kolonii do otaczającego podłoża.

Druga warstwa zawiera pożywkę bezkomórkową, która umożliwia dyfuzję bakteriocyny i zapobiega wzrostowi kolonii LAB na powierzchni.

Teraz wlej trzecią warstwę agaru zawierającą szczep wrażliwy na bakteriocynę.

Bakterie rosnące w trzeciej warstwie napotykają bakteriocynę dyfundującą z niższych warstw.

Bakteriocyna narusza błonę komórkową wrażliwych bakterii, zaburzając homeostazę komórkową i powodując śmierć komórki, widoczną jako wyraźna strefa na trzeciej warstwie.

Zmierz średnicę strefy, aby ocenić siłę działania bakteriocyny.

Aby policzyć komórki bakteryjne wytwarzające bakteriocynę w próbkach kału, przenieś rozcieńczone komórki producenta bakteriocyny do 4 mililitrów wstępnie ogrzanego miękkiego agaru MRS. Wymieszaj agar przez wirowanie i wylej komórki na płytkę z agarem MRS 1,5%. Ta warstwa jest określana jako pierwsza warstwa.

Przenieś kolejne 4 mililitry bezkomórkowego miękkiego agaru 0,8% MRS na pierwszą warstwę, aby osadzić wszystkie komórki w miękkim agarze. Warstwa ta ma na celu zapobieganie wzrostowi komórek jako kolonii na powierzchni płytek agarowych.

W sterylnym kapturze wysusz płytki, zdejmując pokrywkę na pięć do 10 minut przed inkubacją płytek w temperaturze 30 stopni Celsjusza przez 20 do 24 godzin w celu wzrostu komórek i utworzenia kolonii.

Aby zidentyfikować kolonie wytwarzające bakteriocynę, wymieszaj 40 mikrolitrów nocnej kultury odpowiedniego szczepu wskaźnikowego z 4 mililitrami wstępnie podgrzanego miękkiego agaru na każdą płytkę. Wlej mieszaninę na talerze. Ta warstwa jest określana jako trzecia warstwa.

Wysuszyć i inkubować płytki jak poprzednio, w celu wzrostu komórek i utworzenia kolonii. Kolonie wytwarzające bakteriocynę mają wyraźne strefy zahamowania wokół kolonii.

06:38

Zastosowanie techniki miękkiego nakładki agarowej do badań przesiewowych pod kątem związków hamujących wytwarzanych przez bakterie

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:36

Ulepszony test ochrony enzymatycznej do badania internalizacji Staphylococcus aureus i wewnątrzkomórkowej skuteczności związków przeciwdrobnoustrojowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

05:45

Opracowanie procesu suszenia rozpyłowego bakterii probiotycznych i ocena jakości produktu

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:58

Modelowanie kolonizacji pochwy myszy przez bakterie beztlenowe

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:08

Ilościowa identyfikacja Clostridium difficile w próbkach kału z modelu zakażonego myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:57

Assessing Intracellular Bacterial Persistence and Antibiotic Resistance in a Mouse Model

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:51

Mysi model szczepu Clostridium difficile R20291 leczony cefoperazonem

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:54

Metoda oceny wpływu bakteriocyny na mikrobiotę jelitową myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:33

Ilościowe analizy mikrobioty jelitowej myszy po doustnym leczeniu antybiotykami oparte na reakcji łańcuchowej polimerazy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:53

Modele kolonizacji pochwy myszy przez bakterie hodowane beztlenowo

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026