JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:29 min. • July 8th, 2025
Pobrać dwie mikropłytki zawierające szkiełka nakrywkowe z makrofagami pochodzącymi ze szpiku kostnego lub BMM.
Dodaj metacykliczne promastigoty Leishmania - wydłużone stadium wiciowców - na jednej płytce i amastigotes - owalne stadium niewiciowe - na drugiej płytce.
Podczas inkubacji pasożyty wiążą się z receptorami makrofagów, wywołując fagocytozę za pośrednictwem receptorów.
Fagosom łączy się z lizosomami i pęcherzykami pochodzącymi z retikulum endoplazmatycznego i aparatu Golgiego, dojrzewając do wakuoli parazytoforowej.
Obniżone pH wakuoli powoduje różnicowanie promastigoty w amastigotę i jej replikację.
Umyj w celu usunięcia niezinternalizowanych pasożytów.
Napraw zainfekowane makrofagi i dodaj detergent, aby przepuszczalność komórek i pasożytów.
Wprowadź fluorescencyjny barwnik kwasu nukleinowego, aby zabarwić makrofagi i jądra pasożytów.
Zamontuj szkiełka nakrywkowe na szkiełkach podstawowych i obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym, określając ilościowo większe jądra gospodarza i otaczając mniejsze jądra amastigotów.
Porównaj liczbę amastigotów, aby ocenić ich namnażanie się w makrofagach początkowo zakażonych niezróżnicowanymi promastigotykami w porównaniu z tymi zakażo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych