JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:20 min. • July 8th, 2025
Pobrać płytkę wielodołkową zawierającą seryjne rozcieńczenia badanego związku, antybiotyku aminoglikozydowego.
Dodać zawiesinę Mycobacterium tuberculosis - bakterii chorobotwórczej - do studzienek i inkubować.
W cytoplazmie badany związek wiąże się z podjednostką rybosomalną prątków 30S, hamując normalną syntezę białek i ostatecznie prowadząc do śmierci prątków.
Po inkubacji dodaj do kultur rezazurynę — słabo fluorescencyjny barwnik rozpuszczalny w wodzie. Inkubować.
Wewnątrz żywotnych, metabolicznie aktywnych prątków, enzymy dehydrogenazy redukują niebieską resazurynę do różowej fluorescencyjnej rezorufiny.
Za pomocą czytnika płytek fluorescencyjnych zmierz intensywność fluorescencji rezorufiny w studzienkach.
Niska wartość intensywności fluorescencji przy rosnącym stężeniu badanego związku sugeruje jego działanie cytotoksyczne wobec prątków.
Aby przeprowadzić test reazurynowy, hoduj M. tuberculosis w fazie 7H9ADST do połowy logarytmu. Rozcieńczyć kulturę za pomocą 7H9ADST do OD600 0,01. Użyć 7H9ADST do rozcieńczenia związków do dwukrotności stężeń testowych i podwielokrotnia 100 mikrolitrów każdego rozcieńczonego związku do każdego dołka na przezroczystej 96-dołkowej płytce.
Prze
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych