Test biofilmu na płytce kołkowej do badań przesiewowych środków przeciwbakteryjnych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:41 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę do mikromiareczkowania z pokrywką z cylindrycznymi podporami lub kołkami, pokrytymi biofilmami bakteryjnymi.
Umieść pokrywkę pokrytą biofilmem na dołkach z płytką do mikromiareczkowania z buforem, aby wyeliminować luźno przyczepione lub planktonowe bakterie, koncentrując się na pomiarach przyczepionych do biofilmu.
Przenieść wypłukaną, pokrytą biofilmem pokrywkę kołkową na płytkę prowokacyjną o rosnącym stężeniu testowego środka przeciwbakteryjnego. Inkubować bez wstrząsania.
W zależności od stężenia i potencjału przeciwbakteryjnego środek zaburza aktywność metaboliczną bakterii i integralność biofilmu.
Po inkubacji umieścić pokrywkę kołka na studzienkach płytkowych zawierających bufor, aby usunąć bakterie planktonowe.
Przenieść go do studzienek na płytce do mikromiareczkowania za pomocą pożywki do odzyskiwania biofilmu zawierającej rezazurynę, przepuszczalny dla komórek, słabo fluorescencyjny barwnik. Inkubować.
U bakterii aktywnych metabolicznie enzymy dehydrogenazy redukują niebieską rezyzynę do różowej, fluorescencyjnej rezorufiny.
Brak konwersji resazuryny wskazuje na eradykację biofilmu, podczas gdy konwersja do rezorufiny sugeruje obecność żywotnych komórek.
Najni
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych