JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:34 min. • July 8th, 2025
Weź mikropłytkę zawierającą komórki ssaków na lodzie.
Do wybranych studzienek dodać pożywkę zawierającą wapń, a do pozostałych pożywkę bez wapnia.
Wprowadź monomery bakteryjnej toksyny tworzącej pory. Niska temperatura zapobiega agregacji monomerów, ułatwiając wiązanie się z cholesterolem błony komórkowej.
Inkubuj w temperaturze fizjologicznej, pozwalając monomerom związanym z cholesterolem na oligomeryzację i wprowadzenie się do błony, tworząc pory.
W studzienkach z wapniem zewnątrzkomórkowym pory powodują napływ wapnia.
Napływ powoduje egzosomalne wydalanie toksyny i ponowne uszczelnienie błony.
Wewnątrzkomórkowy wzrost wapnia indukuje również lizosomalną egzocytozę, uwalniając enzym, który przekształca sfingomielinę błony w ceramid.
Błona wzbogacona ceramidami wyzwala endocytozę toksyn, ponownie uszczelniając błonę.
Ponowne uszczelnienie błony jest utrudnione w studzienkach bez wapnia zewnątrzkomórkowego.
Dodaj jodek propidyny lub PI - barwnik fluorescencyjny - który nie może dostać się do komórek z naprawioną błoną, ale wnika do uszkodzonych komórek, aby związać DNA, emitując fluorescencję.
Mierz fluorescencję w określonych odstępach czasu, aby ocenić skuteczność ponownego uszc
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych