JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:34 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij od płytki wielodołkowej zawierającej jednokomórkową zawiesinę komórek szpikowych siatkówki myszy, w tym mikrogleju, monocytów i neutrofili.
Mikroglej - lub fagocytarne komórki odpornościowe siatkówki, wykazują fluorescencję z powodu pochłoniętych znakowanych fluoroforem biocząstek pochodzenia grzybowego, wstępnie wstrzykniętych doszklistkowo.
Odwirować i dodać przeciwciała przeciwko receptorowi Fc, blokując niespecyficzne miejsca interakcji."
Wprowadź koktajl przeciwciał znakowanych fluoroforem skierowanych przeciwko białkom powierzchniowym CD11b, Ly6C i Ly6G, oddziałując z komórkami szpikowymi wykazującymi ich ekspresję.
Usuń niezwiązane przeciwciała. Traktuj jodkiem propydyny, który przenika przez uszkodzone błony, barwiąc wyłącznie martwe komórki.
W cytometrii przepływowej wzbudzić jodek propidyny, aby wykluczyć martwe komórki i zidentyfikować żywe komórki niefluorescencyjne.
Oświetl komórki fioletowym laserem; wzbudzone żywe komórki oznaczają komórki szpikowe wykazujące ekspresję CD11b.
Następnie oświetl czerwonym laserem, wzbudzając prawie daleki czerwony fluorofor w komórkach CD11b-dodatnich, wskazując monocyty eksprymujące Ly6C i neutrofile eksprymujące Ly6G.
Wzbu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych