JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:57 min. • July 8th, 2025
Weźmy komórki jednojądrzaste krwi obwodowej lub PBMC, populację komórek mieszanych, w tym limfocyty i monocyty.
Dodaj fluorescencyjny barwnik żywotności, aby rozróżnić martwe komórki, oraz fluorescencyjnie znakowany koktajl przeciwciał, aby zidentyfikować różne typy komórek.
Przeciwciała sprzężone z fluorochromem A wiążą się z markerami powierzchniowymi - CD3 na limfocytach T, receptorze limfocytów T γδ lub TCR na limfocytach T γδ i CD56 na komórkach NK lub NK.
Przeciwciała sprzężone z fluorochromem B wiążą się z CD4 i CD8 na limfocytach T, CD19 na komórkach B i CD14 na monocytach.
Za pomocą cytometrii przepływowej zidentyfikuj podzbiory żywych komórek.
Podczas gdy limfocyty T CD8 + i CD4 + są CD3 +, komórki CD4 + leżą między komórkami pojedynczymi dodatnimi CD3 i podwójnie dodatnimi CD3-CD8.
Limfocyty T γδ wyrażają γδ TCR i wyższe CD3 w porównaniu z komórkami CD4 + i CD8 +.
Limfocyty B i komórki NK są CD3-, ale są identyfikowane przez CD19 na komórkach B i CD56 na komórkach NK.
Monocyty identyfikuje się na podstawie ekspresji CD14.
Aby przygotować PBMC do barwienia, należy przenieść 100 mikrolitrów każdej próbki na 96-dołkową płytkę z dnem w kształcie litery V. Odwirować płytkę w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych