Wykorzystanie sond napięcia opartych na DNA do oceny sił receptorowych wywieranych przez komórki odpornościowe
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:58 min. • July 8th, 2025
Zacznij od funkcjonalizowanego szklanego szkiełka nakrywkowego z nanocząstkami złota zakotwiczonymi w glikolu polietylenowym.
Dodaj sondy napinające spinkę do włosów DNA zawierające spinkę do włosów DNA zhybrydyzowaną z dwoma oligonukleotydami w przeciwległych ramionach.
Nić ligandowa zawiera fluorofor i biotynę, podczas gdy nić kotwiczna zawiera wygaszacz i grupę tiolową. W tej konfiguracji wygaszacz hamuje fluorescencję.
Sondy DNA wiążą się z nanocząstkami złota, zakotwiczając się w szklanym szkiełku nakrywkowym.
Wprowadź streptawidynę, wchodząc w interakcję z cząsteczkami biotyny nici liganda.
Dodaj biotynylowane ligandy, które wiążą się z wstępnie związanymi cząsteczkami streptawidyny.
Na szkiełko nakrywkowe nakładają się limfocyty T CD8-dodatnie; ich receptory oddziałują z unieruchomionymi ligandami, tworząc miejsce interakcji receptor-ligand.
Ta interakcja generuje siłę, która rozwija strukturę spinki do włosów DNA, oddzielając fluorofor od wygaszacza i sprzyjając emisji fluorescencji.
Wprowadź niefluorescencyjne nici blokujące, które oddziałują z rozłożonymi segmentami sondy, aby zachować sygnał fluorescencyjny.
Określ ilościowo fluorescencję, aby ocenić siły receptorów wywi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych