JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:22 min. • July 8th, 2025
Zacznij od szklanego naczynia do obrazowania zawierającego zawiesinę ludzkich neutrofili - lub komórek odpornościowych i wizualizuj je w systemie obrazowania fluorescencyjnego.
Wprowadź genetycznie zmodyfikowane fluorescencyjne konidia reporterowe Aspergillus — lub zarodniki grzybów i rób obrazy w regularnych odstępach czasu do 6 godzin.
Zarodniki grzybów wyrażają białka czerwonej fluorescencji i są zewnętrznie znakowane niedegradowalnymi purpurowymi fluoroforami - pomagając odróżnić martwe komórki od żywych.
Podczas inkubacji neutrofile oddziałują z cząsteczkami związanymi z patogenami na konidiach poprzez receptory rozpoznawania wzorców, ułatwiając ich pochłanianie w fagosomie.
Później fagosom łączy się z lizosomem zawierającym enzym, tworząc fagolizosom.
Wewnątrz fagolizosomu reaktywne formy tlenu i enzymy rozkładają konidia.
Podczas obrazowania żywych komórek, w początkowym punkcie czasowym, intensywna czerwona i purpurowa fluorescencja w fagosomie neutrofili wskazuje na obecność żywych konidiów.
Z biegiem czasu spadek czerwonej fluorescencji z zachowaniem fluorescencji magenty wskazuje na degradację konidiów, potwierdzając działanie przeciwgrzybicze neutrofili.
Aby uwidocznić
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych