JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:49 min. • July 8th, 2025
Weźmy dwuwarstwy lipidowe wspierane przez kulki lub BSLB, kulki krzemionkowe pokryte dwuwarstwami lipidowymi sprzężonymi z antygenowymi kompleksami peptyd-MHC, cząsteczkami adhezyjnymi i kostymulującymi, działającymi jak syntetyczne komórki prezentujące antygen.
Inkubować z limfocytami T.
TCR wiążą się z peptydami antygenowymi na BSLB, które wraz z sygnałami kostymulującymi tworzą synapsę immunologiczną, aktywując limfocyty T.
To wiązanie wyzwala wewnątrzkomórkowe kaskady sygnalizacyjne, indukując przegrupowanie aktyny i tworząc mikroklastry w synapsie zawierającej cząsteczki adhezyjne i sygnałowe.
Limfocyty T uwalniają pęcherzyki transsynaptyczne wzbogacone w TCR, cząsteczki kostymulujące i zawartość granulek litycznych do synapsy, wiążąc się z BSLB.
Stopniowo schładzaj kokulturę, aby oddzielić BSLB od limfocytów T.
Odwirować i wyrzucić supernatant. Użyj buforu zawierającego białko, aby zablokować wolne miejsca wiązania na powierzchniach.
Odwiruj i potraktuj BSLB i limfocyty T przeciwciałami sprzężonymi z fluoroforem, które wiążą się ze specyficznymi cząsteczkami sygnałowymi i kostymulującymi.
Za pomocą cytometrii przepływowej analizuj sygnały fluorescencyjne z BSLB i limfocytów T
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych