JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:38 min. • July 8th, 2025
Weź komórki raka wątroby i inkubuj w niskiej temperaturze, aby upośledzać endocytozę.
Wprowadź rekombinowany wirus zapalenia wątroby typu C lub HCV, składający się ze zmodyfikowanego genomu RNA kodującego wydzielany reporter lucyferazy.
Lipoproteiny wirusa oddziałują z proteoglikanami na komórkach gospodarza, podczas gdy glikoproteiny otoczki wirusa wiążą się ze specyficznymi receptorami gospodarza.
W wybranych studzienkach dodać badany związek, który wiąże się z glikoproteinami wirusowymi.
Po inkubacji w temperaturze fizjologicznej związane wirusy są endocytozyzowane.
Odrzuć niezinternalizowane wirusy, dodaj pożywkę wzrostową i inkubuj.
W nieleczonych studzienkach glikoproteiny wspomagają fuzję otoczki wirusowej z endosomem, uwalniając nukleokapsyd, podczas gdy maskowanie związków upośledza fuzję w studzienkach poddanych obróbce.
Po uwolnieniu RNA ulega ekspresji białek wirusowych, w tym lucyferazy, która jest wydzielana zewnątrzkomórkowo.
Zbierz supernatant zawierający lucyferazy i dodaj bioluminescencyjne podłoże, które jest utleniane przez lucyferazy w celu wyemitowania światła.
Zmniejszona luminescencja w studzienkach poddanych działaniu środka w porównaniu z dołami nieleczony
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych