JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:04 min. • July 8th, 2025
Zacznij od DNAzymu rozszczepiającego RNA, katalitycznego DNA, które po związaniu się z określonym biomarkerem bakteryjnym ulega aktywacji.
DNAzym jest połączony z kulką magnetyczną pokrytą streptawidyną za pomocą biotyny na jej końcu 5'. Na końcu 3' jest związany z ureazą połączoną z oligonukleotydami, tworząc funkcjonalny koralik magnetyczny.
Do probówki zawierającej funkcjonalne kulki magnetyczne dodać lizatan E. coli.
Specyficzny biomarker E. coli z lizatu aktywuje DNAzyme, wywołując rozszczepienie wiązania RNA, powodując oderwanie koniugatu DNAzyme-ureaza.
Użyj podstawki magnetycznej, aby unieruchomić koraliki i usunąć sprzęg DNAzyme-ureaza związany z koralikami.
Przenieść uwolniony supernatant zawierający ureazę do innej probówki.
Dodaj barwnik wskaźnikowy pH — czerwień fenolową i roztwór mocznika.
Ureaza hydrolizuje mocznik do amoniaku i dwutlenku węgla.
Amoniak, słaba zasada, podnosi pH roztworu, powodując zmianę koloru, co wskazuje na obecność biomarkera E. coli.
Po przygotowaniu komórek E. coli zgodnie z protokołem tekstowym, należy wstępnie umyć 1,5-mililitrową probówkę do mikrofuge, dodając i wirując 100 mikrolitrów RB. Następnie wyrzuć bufor.
Dodaj 15 mikrolitrów zmonto
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych