Kolorymetryczne wykrywanie biomarkera bakteryjnego za pomocą zmodyfikowanego papierka lakmusowego

0 wyświetleń3:04 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zacznij od DNAzymu rozszczepiającego RNA, katalitycznego DNA, które po związaniu się z określonym biomarkerem bakteryjnym ulega aktywacji.

DNAzym jest połączony z kulką magnetyczną pokrytą streptawidyną za pomocą biotyny na jej końcu 5'. Na końcu 3' jest związany z ureazą połączoną z oligonukleotydami, tworząc funkcjonalny koralik magnetyczny.

Do probówki zawierającej funkcjonalne kulki magnetyczne dodać lizatan E. coli.

Specyficzny biomarker E. coli z lizatu aktywuje DNAzyme, wywołując rozszczepienie wiązania RNA, powodując oderwanie koniugatu DNAzyme-ureaza.

Użyj podstawki magnetycznej, aby unieruchomić koraliki i usunąć sprzęg DNAzyme-ureaza związany z koralikami.

Przenieść uwolniony supernatant zawierający ureazę do innej probówki.

Dodaj barwnik wskaźnikowy pH — czerwień fenolową i roztwór mocznika.

Ureaza hydrolizuje mocznik do amoniaku i dwutlenku węgla.

Amoniak, słaba zasada, podnosi pH roztworu, powodując zmianę koloru, co wskazuje na obecność biomarkera E. coli.

Po przygotowaniu komórek E. coli zgodnie z protokołem tekstowym, należy wstępnie umyć 1,5-mililitrową probówkę do mikrofuge, dodając i wirując 100 mikrolitrów RB. Następnie wyrzuć bufor.

Dodaj 15 mikrolitrów zmontowanego EC1 do umytej probówki, a następnie umieść probówkę na stojaku magnetycznym i odessaj supernatant. Wyjmij rurkę ze stojaka, dodaj 100 mikrolitrów RB i ostrożnie ponownie zawieś kulki magnetyczne.

Po użyciu RB do dwukrotnego umycia kulek i usunięciu RB, dodaj 10 mikrolitrów próbki E. coli do probówki i delikatnie wymieszaj zawartość, stukając w probówkę. Następnie inkubować reakcję w temperaturze pokojowej przez godzinę.

Po inkubacji dodaj 90 mikrolitrów podwójnie destylowanej wody i umieść probówkę na stojaku magnetycznym. Po około trzech minutach separacji magnetycznej ostrożnie przenieś 85 mikrolitrów supernatantu do 0,5-mililitrowej probówki do mikrofiltrówki.

Bardzo ważne jest, aby ostrożnie pipetować roztwór, nie pobierając żadnych kulek magnetycznych. Te koraliki są naładowane ureazą i generują fałszywie dodatni sygnał.

Dodaj 15 mikrolitrów 0,04% czerwieni fenolowej i 100 mikrolitrów roztworu substratu. Następnie rób zdjęcia w określonych odstępach czasu, aby zarejestrować zmianę koloru.

12:50

Kolorymetryczne wykrywanie Escherichia coli, Salmonella spp. i Listeria monocytogenes na papierze w dużych ilościach wody rolniczej

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:05

Kolorymetryczne wykrywanie bakterii za pomocą papierka lakmusowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:26

Opracowanie i walidacja ultraczułego, cyfrowego testu immunoenzymatycznego z pojedynczą matrycą cząsteczek dla ludzkiego interferonu-α

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:31

„Bioluminescencyjny” fagi raportujący do detekcji bakteryjnych patogenów kategorii A

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

13:20

Wykrywanie bakterii przy użyciu fluorogennych DNAzymów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:30

Wykrywanie i identyfikacja bakterii za pomocą czujników elektrochemicznych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:02

Wykrywanie docelowego analitu za pomocą biosensora bakteryjnego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

01:18

Wykrywanie metabolitów ludzkiego kału za pomocą biosensora bakteryjnego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:54

Multipleksowa ilościowa detekcja bakterii przy użyciu mikrosfer magnetycznych znakowanych barwnikiem

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:17

Monitorowanie zmian polarności błony, integralności błony i stężeń jonów wewnątrzkomórkowych w Streptococcus pneumoniae przy użyciu barwników fluorescencyjnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026