JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:10 min. • July 8th, 2025
Weźmy studzienki zawierające hydrożele poliakrylamidowe o różnej sztywności pokryte kolagenem, naśladujące fizjologiczną macierz zewnątrzkomórkową lub ECM.
Dodaj komórki śródbłonka mikronaczyniowego, które tworzą zrosty ogniskowe lub FA - kompleksy pośredniczące w wiązaniu komórka-ECM - aby wyczuć sztywność hydrożelu.
Sztywniejsze hydrożele zwiększają ekspresję wimentyny na powierzchni komórki, składnika cytoszkieletu, w porównaniu z bardziej miękkimi hydrożelami.
Dodaj bakterie Listeria monocytogenes, zaprojektowane do ekspresji białka fluorescencyjnego pod promotorem białka indukującego składanie aktyny lub ActA.
Wirować w celu zsynchronizowania kontaktu bakterii z komórkami gospodarza i inkubacji.
Bakterie wiążą się z wimentyną. Więcej wimentyny na sztywniejszych komórkach gospodarza związanych z hydrożelem prowadzi do większego przylegania bakterii i endocytozy.
Dodaj antybiotyk, eliminując niezinternalizowane bakterie.
Zinternalizowane bakterie wydzielają toksyny, rozrywając błonę endosomu. Ucieczka cytoplazmatyczna aktywuje promotor ActA do ekspresji białka fluorescencyjnego, znakując bakterie wewnątrzkomórkowe.
Enzymatycznie odłącz komórki. Za pomocą cytometrii przepływowej
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych