JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:24 min. • July 8th, 2025
Pobrać płytkę wielodołkową z przylegającymi monowarstwami ludzkich komórek śródbłonka na hydrożelach poliakrylamidowych pokrytych kolagenem o różnej sztywności.
Komórki na sztywniejszych hydrożelach ulegają znacznej reorganizacji cytoszkieletu, zwiększając napięcie wewnątrzkomórkowe w porównaniu z bardziej miękkimi hydrożelami.
Umyj komórki pożywką i dodaj zmodyfikowane Listeria monocytogenes — wykazujące ekspresję białka fluorescencyjnego pod promotorem białka indukującego składanie aktyny (ActA).
Wirówka ułatwiająca kontakt komórki z bakteriami. Inkubować za pośrednictwem endocytozy bakteryjnej.
Umyć mediami. Traktuj gentamycyną, aby wyeliminować niezinternalizowane bakterie. Inkubować.
Zinternalizowane bakterie uwalniają toksyny tworzące pory, zaburzając błony fagosomalne. Bakterie cytozolowe zwiększają ekspresję ActA i fluorescencji białek, znakując bakterie wewnątrzkomórkowe.
Białka ActA indukują polimeryzację aktyny, tworząc warkocz komety aktyny, który popycha bakterie do przodu, powodując internalizację przez sąsiednie komórki i sprzyjając rozprzestrzenianiu się.
Po inkubacji użyj pożywki zawierającej barwnik do barwienia jąder komórkowych. Zastąp pożywkę pożywką zawierając
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych