Określanie roli komórek neutrofilopodobnych we wrażliwości komórek chłoniaka na badany lek

Weź płytkę wielodołkową zawierającą sferoidalne monokultury 3D komórek chłoniaka, rakowych białych krwinek oraz kokultury chłoniaka i komórek podobnych do neutrofili w macierzy błony podstawnej.

Dodaj badany lek, który wiąże się z tubuliną wewnątrzkomórkową i zakłóca polimeryzację mikrotubul, powodując apoptozę komórkową.

W kohodowli bezpośredni kontakt komórek chłoniaka aktywuje komórki podobne do neutrofili, indukując wydzielanie cytokin.

Cytokiny te oddziałują z receptorami komórek chłoniaka, wyzwalając kaskady sygnalizacyjne i zwiększając ekspresję białek antyapoptotycznych, promując przeżycie komórek.

Wyrzuć nośnik. Dodaj bufor dysocjacyjny, aby zakłócić adhezję komórkową.

Zeskrob sferoidy i inkubuj je pod mieszaniem. Przenieść zawiesinę do probówek i kontynuować mieszanie w celu utworzenia zawiesiny jednokomórkowej.

Wprowadź koktajl przeciwciał sprzężonych z fluoroforem, który oznacza chłoniaka i komórki podobne do neutrofili.

Dodaj znakowaną fluoroforem anektynę V i jodek propidyny, aby oznaczyć apoptozę i martwe komórki.

Za pomocą cytometrii przepływowej wykryj zwiększoną przeżywalność komórek chłoniaka w kohodowli, co wskazuje na ochronę przed lekiem za pośrednictwem neutr