Test in vitro do oceny immunomodulacyjnego wpływu monocytów na proliferację leukocytów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:46 min. • July 8th, 2025
Weź wielodołkową płytkę z przylegającą hodowlą mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC).
Dodaj komórki jednojądrzaste krwi obwodowej lub PBMC i inkubuj.
MSCs wydzielają czynnik wzrostu hepatocytów, indukując monocyty do uzyskania fenotypu immunomodulującego, wytwarzającego interleukinę-10 lub IL-10.
Przenieść supernatant zawierający PBMC do probówki.
Dodaj pokryte przeciwciałem kulki magnetyczne wiążące się z markerem powierzchniowym monocytów CD14.
Użyj separatora magnetycznego, aby wyizolować monocyty CD14 + i dodać je do studzienek wielodołkowych w rosnących stężeniach.
Wprowadź fluorescencyjne limfocyty T CD4 + efektorowe CD4 + znakowane barwnikiem fluorescencyjnym.
Dodaj mikrogranulki sprzężone z przeciwciałami, wiążące się specyficznie z markerami powierzchniowymi limfocytów T CD3 i CD28, aktywując komórki.
W grupie kontrolnej, w której brakuje monocytów, aktywowane limfocyty T proliferują, a każdy podział komórki zmniejsza intensywność fluorescencji CFSE w komórkach potomnych.
Jednak w kokulturach monocyty indukowane przez MSC wydzielają IL-10, hamując proliferację efektorowych limfocytów T.
Za pomocą cytometrii przepływowej obserwuj mniej limfocytów T wykazujących zmniej
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych