Test przylegania do fazy stałej w celu oceny tworzenia się biofilmu

0 wyświetleń4:07 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weź płaską płytkę wielodołkową z dołkami zawierającymi bakterie w pożywce wzrostowej lub bakterie w pożywce wzrostowej uzupełnionej solą żółciową.

Sole żółciowe wywołują stres, powodując uszkodzenia komórek i uwalniając DNA i białka. Te biomolekuły pokrywają dno studzienek, umożliwiając ocalałym bakteriom przyleganie do powierzchni ciała stałego.

Przyłączone bakterie namnażają się, tworząc mikrokolonie i wytwarzając autoinduktory – czyli chemiczne cząsteczki sygnalizacyjne, umożliwiające komunikację bakterii.

Ta komunikacja skłania bakterie do kolonizacji i inicjowania produkcji zewnątrzkomórkowych substancji polimerowych lub EPS, generując biofilm.

Po inkubacji usuń pożywkę, aby wyeliminować swobodnie pływające bakterie.

Wprowadź krystaliczną fioletową plamę, która oddziałuje z peptydoglikanem ściany komórkowej bakterii, nadając jej fioletowy kolor.

Usuń nadmiar plamy i wysusz. Nakładka z etanolem w celu rozpuszczenia fioletu krystalicznego ze ściany komórkowej bakterii, zmieniając kolor roztworu.

Intensywniejsze zabarwienie w studzienkach poddanych działaniu soli żółciowej niż w studzienkach niepoddanych działaniu soli żółciowej potwierdza tworzenie się biofilmu poprzez przyleganie do fazy stałej.

Najpierw oznacz dwie 1,5-mililitrowe rurki jako TSB i TSB plus BS. Następnie dodaj 1 mililitr TSB lub TSB plus BS do odpowiednich probówek.

Następnie zaszczepić probówki 20 mikrolitrami nocnej kultury w rozcieńczeniu 1:50. Następnie dodaj 130 mikrolitrów niezaszczepionej pożywki kontrolnej do każdej z trzech studzienek na sterylnej, przezroczystej, 96-dołkowej płytce z płaskim dnem poddanej działaniu kultur tkankowych. Będzie to pusta kontrolka.

Dodaj 130 mikrolitrów zaszczepionej kultury do każdej z trzech studzienek. Po dodaniu kultury kontrolnej i zaszczepionej do odpowiednich studzienek, inkubować 96-dołkową płytkę przez 4 do 24 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza statycznie. Po zakończeniu inkubacji ustawić kontrolkę jako pustą na czytniku płytek.

Następnie odessaj pożywkę hodowlaną z każdej studzienki. Następnie delikatnie umyj studzienki raz 200 mikrolitrami sterylnego PBS. Po umyciu odessać PBS, a następnie odwrócić płytkę do wyschnięcia przez około 20 minut.

Bardzo ważne jest, aby zapewnić delikatne usunięcie nośnika i delikatne mycie, aby upewnić się, że matryca EPS nie zostanie naruszona.

Następnie dodaj 150 mikrolitrów 0,5% fioletu krystalicznego do każdej z studzienek doświadczalnych i kontrolnych. Następnie inkubuj płytkę przez pięć minut w temperaturze pokojowej. Po pięciu minutach umyj studzienki 400 mikrolitrami wody destylowanej. Dodaj 200 mikrolitrów wody destylowanej, aby pięciokrotnie umyć studzienki. Po wszystkich pięciu praniach odwróć talerz i pozostaw go do całkowitego wyschnięcia, chroniony przed światłem.

W celu uzyskania spójnych wyników ważne jest, aby próbki zostały dokładnie wysuszone przed kontynuowaniem.

Po całkowitym wyschnięciu płytki użyj 200 mikrolitrów 95% etanolu do odbarwienia studzienek. Następnie pozostaw płytkę na shakerze na 30 minut w temperaturze 4 stopni Celsjusza, aby uniknąć parowania. Po 30 minutach zapisz OD540 na czytniku płytek.

09:39

Platforma testów antybiofilmowych dostosowana do eksploracji bibliotek związków naturalnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:57

Wytwarzanie większej biomasy biofilmu bakteryjnego za pomocą urządzeń do mikropłytek głębinowych PCR-Plate

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:50

Rozpuszczalny test redukcyjny na bazie tetrazoliu do oceny wpływu przeciwciał na biofilmy Candida tropicalis

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:57

Analiza tworzenia biofilmu w płytkach mikrotitrowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:17

Półilościowe podejście do oceny tworzenia biofilmu z wykorzystaniem rozwoju pomarszczonych kolonii

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

01:19

Ocena powstawania biofilmu bakteryjnego za pomocą testu na bazie barwnika kationowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:41

Test biofilmu na płytce kołkowej do badań przesiewowych środków przeciwbakteryjnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:49

Wykrywanie demontażu biofilmu za pomocą testu dyspersyjnego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

11:14

Wizualizacja tworzenia się biofilmu u Candida albicans za pomocą zautomatyzowanego urządzenia mikroprzepływowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:05

Tworzenie biofilmu wywołanego solą żółciową w patogenach jelitowych: techniki identyfikacji i kwantyfikacji

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 15 sierpnia 2026