Metoda przygotowania próbki w celu wizualizacji bakterii tworzących biofilm na strzępkach grzybów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:37 min. • July 8th, 2025
Wprowadź kolonię grzybów związanych z celofanem do znakowanej fluorescencyjnie zawiesiny bakteryjnej. Usuń celofan i inkubuj.
Komórki bakteryjne przylegają do powierzchni grzyba za pośrednictwem cząsteczek powierzchniowych i receptorów. Przylegające bakterie wydzielają zewnątrzkomórkowe substancje polimerowe składające się z polisacharydów, białek i DNA, zatrzymując komórki bakteryjne i tworząc strukturalną podstawę biofilmu.
Opłucz sekcję w silnym roztworze soli, aby usunąć luźno związane bakterie
W buforze fosforanowym wytnij część kolonii.
Przenieś skrawek do sterylnej wody zawierającej aglutyninę z kiełków pszenicy lub WGA związaną z czerwonym barwnikiem fluorescencyjnym.
WGA, białko roślinne, wiąże się z N-acetyloglukozaminą i resztą kwasu sjalowego, umożliwiając przyłączony barwnik fluoryzację na ścianie komórkowej grzyba.
Przepłukać sekcję w buforze fosforanowym.
Częściowo zanurz suwak w buforze. Niech sekcja unosi się na nim. Delikatnie podnieś, aby sekcja osiadła bez przerywania biofilmu.
Umieścić podłoże montażowe, a następnie szkiełko nakrywkowe do analizy mikroskopowej.
Po wyhodowaniu bakterii przez noc odwiruj kulturę z prędkością 5,000 razy g przez trzy minuty, a nast
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych