Analiza w czasie rzeczywistym migracji rezydentnych limfocytów T w różnych regionach guza przy użyciu mikroskopii konfokalnej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:23 min. • July 8th, 2025
Zacznij od wycinka guza płuc zawierającego rezydujące limfocyty T.
Limfocyty T migrują przez mikrośrodowisko guza i wchodzą w interakcje z komórkami nowotworowymi i elementami zrębu, pełniąc funkcje odpornościowe.
Skład mikrośrodowiska guza silnie wpływa na przemieszczanie się i prędkość limfocytów T.
Dodaj odrębne fluorescencyjnie sprzężone przeciwciała, aby znakować limfocyty T, komórki nowotworowe i elementy zrębu w mikrośrodowisku.
Dodaj DAPI, który nacieka komórki z uszkodzoną błoną plazmatyczną, aby zabarwić jądro, umożliwiając wizualizację martwiczych regionów w obrębie guza
.Obserwuj zabarwioną próbkę pod mikroskopem konfokalnym.
Używając odpowiedniego światła fluorescencyjnego, wybierz interesujący Cię obszar nowotworowy zawierający rezydentne limfocyty T. Oceń żywotność komórek, oceniając komórki DAPI-dodatnie.
Do analizy w czasie rzeczywistym zdefiniuj przedziały czasowe i całkowity czas nagrywania.
Aby przechwycić obrazy stosu z, zacznij od głębokości poniżej oznaczonych komórek T i przechwytuj obrazy w różnych odstępach czasu.
Wykorzystaj oprogramowanie śledzące, aby porównać długość przemieszczenia komórek T i średnią prędkość w różnych regionach guza.
Rozcieńczyć wym
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych