Pomiar aktywacji funkcji efektorowych za pośrednictwem Fc przez przeciwciała HA
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:03 min. • July 8th, 2025
Weźmy na przykład seryjne rozcieńczenia przeciwciała skierowanego przeciwko hemaglutyniny wirusa grypy lub HA, glikoproteinie składającej się z globularnej głowy i łodygi.
Dodać rozcieńczenia do transfekowanych komórek ssaków wykazujących ekspresję związanego powierzchniowo kwasu hialuronowego. Przeciwciała wiążą się z regionami łodygi HA, tworząc kompleksy odpornościowe.
Wprowadź zmodyfikowane limfocyty T eksprymujące receptory Fc i kodujące reporter lucyferazy pod kontrolą czynnika transkrypcyjnego NFAT.
Podczas inkubacji przeciwciało związane z HA wiąże się z receptorem Fc, podczas gdy głowa HA wiąże się z kwasem sjalowym, wywołując aktywację limfocytów T i zwiększając stężenie wapnia cytozolowego.
Ta aktywacja inicjuje kaskadę sygnalizacyjną, która powoduje defosforylację NFAT, wywołując jego translokację jądrową.
NFAT wiąże się ze swoimi elementami odpowiedzi w genomie, napędzając ekspresję lucyferazy.
Dodaj przepuszczalne dla komórek podłoże bioluminescencyjne. Lucyferazy utlenia substrat, wytwarzając sygnał.
Zmniejszona luminescencja wraz ze spadkiem stężenia przeciwciał potwierdza aktywację limfocytów T za pośrednictwem przeciwciał T specyficznych dla łodygi HA.
Aby ocenić
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych