JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:51 min. • July 8th, 2025
Weźmy mysz uodpornioną metalopeptydazą. Zbierz śledzionę i uzyskaj zawiesinę komórkową.
Przefiltruj zawiesinę przez siatkę i odwiruj, usuwając resztki tkanek.
Izolowane komórki zawierają limfocyty B specyficzne dla metalopeptydazy, wytwarzające przeciwciała przeciwko epitopom metallopeptydazy.
Dodaj nieśmiertelne komórki szpiczaka pozbawione enzymu HGPRT, co uniemożliwia odzyskanie zasad nukleotydowych do syntezy nukleotydów. Przeżywają one poprzez syntezę nukleotydów de novo.
Odwirować w celu uzyskania osadu i wyrzucić supernatant.
Dodaj PEG i inkubuj, indukując fuzję komórek szpiczaka B w celu utworzenia nieśmiertelnych hybrydomów HGPRT-dodatnich.
Dodaj pożywkę HAT zawierającą hipoksantynę, aminopterynę i tymidynę. Przenieś do studzienek zawierających warstwę zasilającą makrofagi otrzewnej, promując wzrost hybrydoma.
Aminopteryna blokuje syntezę nukleotydów de novo, powodując śmierć niepołączonych komórek szpiczaka. Niepołączone limfocyty B umierają z powodu ich krótkiej żywotności.
Hybrydomy HGPRT-dodatnie ratują prekursory nukleotydów hipoksantynę i tymidynę, proliferują i wydzielają przeciwciała monoklonalne specyficzne dla metalopeptydazy.
Zebrać supernatant, aby potwierdzić
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych