Test sztucznej aktywacji in vitro do badania aktywacji receptora Fc przez przeciwciała
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:32 min. • July 8th, 2025
Weź zawiesinę komórek NK lub NK.
Dodać przeciwciała monoklonalne anty-CD20 i inkubować.
W przypadku braku docelowych komórek nowotworowych wykazujących ekspresję antygenu CD20, region Fc przeciwciał wiąże się z receptorami FcγRIIIa na powierzchni komórek NK.
Po inkubacji dodać schłodzone podłoże. Odwirować i usunąć niezwiązane przeciwciała.
Następnie dodaj przeciwciała przeciwko ludzkiemu łańcuchowi lekkiemu κ. Inkubować.
Te przeciwciała drugorzędowe wiążą się z łańcuchem lekkim κ przeciwciał monoklonalnych.
Sieciowanie przeciwciał naśladuje wiązanie docelowego antygenu, wyzwalając wewnątrzkomórkową kaskadę sygnalizacyjną.
Powoduje to sztuczną stymulację komórek NK przy braku komórek nowotworowych.
Aktywowane komórki NK ulegają przegrupowaniu cytoszkieletu i uwalniają ziarnistości cytotoksyczne.
Ponadto komórki wytwarzają chemokiny i cytokiny.
Po upływie pożądanego czasu dodaj schłodzone podłoże, aby zatrzymać stymulację komórek.
Odwirować probówkę. Zebrać supernatant i osad komórkowy do dalszej analizy funkcji komórek NK efektorowych za pośrednictwem przeciwciał.
Dozuj 100 mikrolitrów zawieszonych komórek NK do 1,5-mililitrowych probówek lub 96-dołkowej płytki dolnej w kształcie l
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych