JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:53 min. • July 8th, 2025
Weźmy eukariotyczne wektory ekspresyjne, kodujące łańcuch ciężki przeciwciała lub łańcuch lekki przeciwciała, sklonowane z limfocytów B specyficznych dla antygenu.
Wprowadź polietylenininę, polimer kationowy, który elektrostatycznie oddziałuje z ujemnie naładowanymi wektorami, tworząc polipleksy.
Inkubuj komórki ssaków za pomocą polipleksów, które przylegają do komórek i są internalizowane przez endocytozę. Powstałe endosomy łączą się z lizosomami.
Polimery w polipleksach powodują osmotyczne pęcznienie pęcherzyka, co prowadzi do jego pęknięcia i uwolnienia wektorów.
Uwolnione wektory dostają się do jądra i są transkrybowane na mRNA o łańcuchach ciężkich i lekkich, które ulegają translacji przez rybosomy na retikulum endoplazmatycznym.
Powstałe łańcuchy peptydowe łączą się w przeciwciała, które są transportowane do Golgiego i pakowane w pęcherzyki wydzielnicze.
Po zespoleniu pęcherzyków wydzielniczych i błony komórkowej przeciwciała są uwalniane zewnątrzkomórkowo.
Pobrać supernatant zawierający przeciwciała do dalszych testów.
Wysiewaj 15 000 ludzkich embrionalnych komórek nerkowych w 200 mikrolitrach zmodyfikowanego podłoża Dulbecco's Modified Eagle Medium, uzupełnionego 10% płodow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych