JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:28 min. • July 8th, 2025
Weźmy kolumnę FPLC zawierającą porowatą szklaną żywicę z unieruchomionym białkiem A - białkiem bakteryjnym wiążącym przeciwciała. Zrównoważyć kolumnę buforem o neutralnym pH.
Dodać płyn do hodowli komórkowych pobrany z komórek jajnika chomika chińskiego, zawierający przeciwciała monoklonalne oraz zanieczyszczające białka i DNA.
Białko A wiąże się z regionem Fc przeciwciała, unieruchamiając je.
Niektóre zanieczyszczenia niespecyficznie przyczepiają się do żywicy, podczas gdy reszta przepływa.
Na chromatogramie zwiększona absorbancja promieniowania UV podczas ładowania próbki wskazuje na wysokie stężenie białka w przepływie.
Przemyć buforem równoważącym w celu usunięcia niezwiązanych zanieczyszczeń, co wskazuje na zmniejszenie absorbancji.
Przepłukać buforem o wysokiej zawartości soli, przerywając niespecyficzne interakcje i usuwając zanieczyszczenia, na co wskazuje niewielki pik zanieczyszczenia.
Dodaj bufor elucyjny o niskim pH, aby zakłócić interakcję białka A z przeciwciałem i wymyć przeciwciała, które są zbierane przez śledzenie odpowiedniego piku.
Zneutralizuj pH pobranych przeciwciał, aby zapobiec degradacji.
Zacznij od otwarcia oprogramowania dołączonego do systemu oczyszczan
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych