Test do pomiaru miana przeciwciał neutralizujących specyficznego dla syncytialnego wirusa oddechowego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:01 min. • July 8th, 2025
Weź seryjnie rozcieńczoną, inaktywowaną termicznie surowicę ludzką zawierającą syncytialny wirus oddechowy lub przeciwciała neutralizujące specyficzne dla RSV.
Dodaj zawiesinę wirusa. Przeciwciała neutralizują wirusy w sposób zależny od rozcieńczenia.
Wprowadzić mieszaninę do monowarstw ludzkich komórek nabłonkowych i inkubować w celu adsorpcji wirusa.
Wyrzuć mieszaninę. Dodać pożywkę zawierającą karboksymetylocelulozę, tworząc półstałą powłokę. Inkubować.
RSV wykorzystuje maszynerię komórki gospodarza do syntezy wirusowego RNA i białek, które następnie łączą się i pączkują jako indywidualne wiriony.
Zainfekowane komórki w końcu umierają. Karboksymetyloceluloza ogranicza przemieszczanie się wirusa, powodując miejscową infekcję i śmierć komórek, tworząc blaszki.
Usuń nakładkę.
Utrwal komórki za pomocą buforu zawierającego aceton. Wprowadź bufor blokujący zawierający detergent, aby przeniknąć komórki i zapobiec niespecyficznym interakcjom przeciwciał.
Dodaj pierwszorzędowe przeciwciała skierowane przeciwko białkom wirusowym.
Nakładka z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem skierowanymi na przeciwciała pierwszorzędowe.
Zobrazuj studzienki, aby określić ilościowo blas
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych