Wykrywanie ludzkich autoprzeciwciał wysp trzustkowych za pomocą testu elektrochemiluminescencyjnego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:09 min. • July 8th, 2025
Aby wykryć autoprzeciwciała wysp trzustkowych – biomarker cukrzycy typu 1 – należy pobrać próbki surowicy ludzkiej i dodać kwas octowy w celu zahamowania składników zakłócających.
Inkubować, a następnie dodać bufor alkaliczny, aby zneutralizować kwas.
Przenieść surowicę poddaną działaniu substancji na wielodołkową płytkę zawierającą mieszaninę autoantygenów ludzkich wysp trzustkowych, w tym antygeny biotynylowane i antygeny sprzężone z rutenem, każdy w stężeniu optymalnym dla testu.
Autoprzeciwciało wysp trzustkowych w próbce dodatniej łączy antygen sprzężony rutenem z biotynylowanym antygenem wychwytującym, tworząc kompleks antygen-przeciwciało.
Przenieść mieszaninę na płytkę elektrochemiluminescencyjną pokrytą streptawidyną, wstępnie potraktowaną środkiem blokującym i wyposażoną w elektrody robocze i przeciwelektrody.
Inkubować, aby umożliwić interakcje biotynylowanego kompleksu ze związaną streptawidyną, a następnie przemyć.
Dodać bufor zawierający tripropyloaminę lub TPA.
W przyrządzie do elektrochemiluminescencji przyłożenie napięcia między elektrodami inicjuje utlenianie rutenu i TPA, generując rodniki TPA.
Rodniki TPA wzbudzają kompleksy rutenu, które emitują fotony, wracają
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych