JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:54 min. • July 8th, 2025
Weź mikropłytkę zawierającą grzyba Candida tropicalis.
Komórki wydzielają Sap2, enzym proteolityczny, który rozszczepia transbłonową glikoproteinę zwaną Msb2, usuwając jej domenę hamującą.
To powoduje, że grzyb przylega do dna i rozwija się w mikrokolonię drożdży i form nitkowatych. Komórki wydzielają rozpuszczalne składniki i biopolimery, inicjując tworzenie biofilmu.
Dodać próbkę surowicy zawierającą przeciwciała specyficzne dla Sap2 do wybranych studzienek i inkubować w ciemności.
Przeciwciała wiążą się z Sap2 i neutralizują jego aktywność, utrudniając żywotność komórek i dojrzewanie biofilmu.
W nieleczonych studzienkach biofilm dojrzewa do gęstej sieci komórek i macierzy zewnątrzkomórkowej.
Odessać płyn, umyć biofilm i wysuszyć płytkę na powietrzu. Dodaj substrat chromogeniczny i inkubuj w ciemności.
Żywe komórki, wykorzystując oksydoreduktazy związane z błoną, redukują substrat do kolorowego produktu.
Przenieść barwny supernatant i odczytać absorbancję.
Niższa absorbancja w studzienkach poddanych działaniu surowicy wskazuje na hamowanie biofilmu za pośrednictwem przeciwciał.
Przygotować seryjne rozcieńczenia próbek surowicy inaktywowanej termicznie w sterylnym pożywce RPMI1640
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych