JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:31 min. • July 8th, 2025
Zacznij od naczynia hodowlanego zawierającego utrwalone formaliną, wypełnione żelatyną kriosekcje jelita czczego myszy z komórkami kępkowymi z mikrokosmkami wierzchołkowymi i somą w kształcie szpuli.
Przemyć buforem zawierającym detergent, aby przepuszczalność błon komórkowych.
Dodaj alkaliczny roztwór do pobierania antygenu. Inkubować w celu zerwania wiązań krzyżowych białek wywołanych fiksacją, odsłaniając białka do barwienia.
Zastosuj roztwór blokujący, aby zapobiec wiązaniu się nieswoistych przeciwciał.
Nakładka z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko białku wiążącemu aktynę, specyficznie fosforylowanemu w komórkach kępkowych.
Usuń niezwiązane przeciwciała. Wprowadź mieszaninę przeciwciał drugorzędowych sprzężonych z fluoroforem, barwnika wiążącego DNA i koniugatu faroidyny z barwnikiem fluorescencyjnym.
Przeciwciała drugorzędowe wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi, sprzężone znaczniki barwnika falloidyny i fluorescencyjnego aktyny, a barwnik wiążący DNA oznacza jądra komórkowe.
Usuń niezwiązane składniki i dodaj bufor bez detergentów.
Przenieś sekcję na szkiełko powlekane klejem, montując je za pomocą nośnika.
Pod mikroskopem konfokalnym zielone komó
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych