Technika immunofluorescencji z podwójnym znakowaniem do wizualizacji białek gospodarza i patogenu w zakażonej komórce
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:44 min. • July 8th, 2025
Zacznij od utrwalonych i przepuszczalnych komórek nabłonka zakażonych patogennym pasożytem.
Dodaj bufor blokujący, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych.
Nakładka z mysimi poliklonalnymi przeciwciałami pierwszorzędowymi, specyficznie oddziałującymi z białkami pasożyta.
Dodaj dalekoczerwone przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem, które oddziałują z pasożytniczymi przeciwciałami pierwszorzędowymi związanymi z białkami.
Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał. Blokuj z przeciwciałami anty-mysimi, które wiążą się z przeciwciałami pierwotnymi, minimalizując reaktywność krzyżową podczas znakowania białka gospodarza.
Dodaj mysie monoklonalne przeciwciała pierwszorzędowe skierowane przeciwko rybonukleoproteinom gospodarza w komórkach nabłonkowych.
Nałożyć mieszaninę zielonych przeciwciał drugorzędowych znakowanych fluoroforem i falloidyny sprzężonej z czerwonym fluoroforem, ułatwiając znakowanie odpowiednio przeciwciał pierwszorzędowych związanych z białkiem gospodarza i aktyny.
Umyć buforem. Zamontuj za pomocą pożywki zawierającej barwniki DNA, nadając niebieskie zabarwienie jądru gospodarza, jądru pasożyta i kinetoplastowi.
Analizować próbki za pomocą mikros
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych