Wytwarzanie przeciwciał z okresowej hodowli przerostu transfekowanych komórek ssaków
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:29 min. • July 8th, 2025
Rozpocząć od kolby zawierającej stabilnie transfekowane komórki ssaków w pożywce bez surowicy, uzupełnionej niejonowym środkiem powierzchniowo czynnym, aby zapobiec agregacji komórek.
Komórki te mają zmodyfikowany genom zawierający zintegrowane geny o ciężkich i lekkich łańcuchach do produkcji przeciwciał terapeutycznych.
Wprowadź trypton, bogate w składniki odżywcze źródło peptydów i aminokwasów niezbędnych do metabolizmu komórkowego.
Komórka wykorzystuje te aminokwasy i peptydy i namnaża się, co powoduje przerost, który sprzyja wyższej wydajności przeciwciał.
Ekspresja genów w komórkach napędza produkcję polipeptydów o ciężkich i lekkich łańcuchach.
W retikulum endoplazmatycznym łańcuchy te fałdują się i dimeryzują poprzez międzyłańcuchowe wiązania dwusiarczkowe, tworząc przeciwciała terapeutyczne.
W aparacie Golgiego przeciwciała ulegają modyfikacjom potranslacyjnym. Następnie są pakowane w pęcherzyki i uwalniane do pożywki.
Inkubuj komórki przez dłuższy czas, aby zwiększyć produkcję przeciwciał.
Gdy żywotność komórek zaczyna spadać, zbierz supernatant.
Przefiltrować supernatant zawierający przeciwciała terapeutyczne i przechowywać go w niższej temperaturze do późniejszego wykor
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych