JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:03 min. • July 8th, 2025
Weźmy kolumnę chromatograficzną o powinowactwie zawierającą kulki agarozy sprzężone z białkiem A, białkiem wiążącym przeciwciała.
Dodaj bufor wiążący o neutralnym pH, aby zrównoważyć kolumnę.
Załadować supernatant hodowli z hodowli komórkowej wytwarzającej przeciwciała, zawierającej przeciwciała monoklonalne i zanieczyszczających białka komórkowe.
Neutralne pH ułatwia wiązanie białka A z regionem Fc przeciwciał podczas przepływu zanieczyszczeń.
Zmierz absorbancję UV przepływu, aby utworzyć chromatogram. Wysoka absorbancja podczas ładowania próbki wskazuje na niezwiązane białka w przepływie.
Przemyć kolumnę buforem wiążącym w celu usunięcia niespecyficznie związanych zanieczyszczeń.
Dodaj bufor elucyjny o niskim pH, aby zakłócić interakcję białka A z przeciwciałem. Zebrać eluowane przeciwciała, monitorując pik absorpcji.
Zneutralizuj pH, aby zapobiec degradacji przeciwciał i przenieś do filtra odśrodkowego.
Odwirować w celu zagęszczenia przeciwciał i ponownego zawieszenia w buforze do dalszych testów.
Po przygotowaniu i zainicjowaniu systemu FPLC zgodnie z protokołem tekstowym, użyj edytora metod, aby skonfigurować kroki uruchamiania w następujący sposób. Zrównoważ system za pomocą
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych