JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:18 min. • July 8th, 2025
Weźmy mysi wycinek mózgu składający się z zakrętu zębatego hipokampa, miejsca neurogenezy złożonego z neuronalnych komórek progenitorowych na różnych etapach różnicowania.
Przenieś przekrój do roztworu blokującego przepuszczalność. Cząsteczki detergentu w roztworze przenikają do komórek, podczas gdy białka blokują niespecyficzne miejsca wiązania.
Dodaj pierwszorzędowy koktajl przeciwciał ukierunkowany na określone markery neurogenezy, białko związane z mikrotubulami i białko pośrednie filamentu.
Usunąć niezwiązane przeciwciała. Wprowadź różne przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem wiążące się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Dodaj białka surowicy od tego samego gospodarza, co jedno z przeciwciał pierwszorzędowych, nasycając paratopy przeciwciał drugorzędowych.
Wprowadź monowalentne fragmenty Fab, które nasycają epitopy białek surowicy, zapobiegając niespecyficznemu wiązaniu.
Dodaj drugie przeciwciało pierwotne podniesione przez tego samego gospodarza, wiążące się z innym pośrednim białkiem filamentowym.
Wprowadzić przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem skierowane przeciwko drugiemu przeciwciału pierwszorzędowemu.
Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej zidentyfi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych