JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:43 min. • July 8th, 2025
Weź stałą nerkę myszy. Lipidy w tkance powodują rozpraszanie światła, a pigmenty powodują absorpcję światła, powodując, że komórki są nieprzezroczyste.
Potraktuj tkankę CUBIC-L w celu odlipidowania i odbarwienia. Aminoalkohol w CUBIC-L usuwa lipidy i pigmenty, minimalizując rozpraszanie światła i zwiększając przezroczystość.
Cząsteczki detergentu w CUBIC-L przenikają również do komórek.
Wprowadź pierwszorzędowy koktajl przeciwciał, który wiąże się z cytoplazmatyczną hydroksylazą tyrozynową w neuronach nerwów współczulnych i aktyną mięśni gładkich alfa w komórkach mięśni gładkich naczyń.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Wykonaj postfiksację tkanki, aby zachować leczenie przeciwciałami.
Zanurz tkankę w CUBIC-R+, który zastępuje wodę i odpowiada współczynnikowi załamania światła białek, dodatkowo minimalizując rozpraszanie światła i zwiększając przezroczystość.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym z arkuszami świetlnymi arkusze świetlne oświetlają tkankę, pobudzając fluorofory.
Uchwyć światło emitowane przez fluorofor i zrekonstruuj trójwymiarowy obraz, przedstawiający rozkład nerwów współczulnych wokół tętnic w ner
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych