JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:09 min. • July 8th, 2025
Weźmy kriosekcję biopsji skóry od pacjenta z chorobą Parkinsona zamkniętego w pożywce.
Tkanka składa się z najbardziej zewnętrznego naskórka, leżącej poniżej skóry właściwej i podskórnej tkanki tłuszczowej unerwionej przez nerwy.
Umyj sekcję, aby usunąć medium do zatapiania. Przenieś go do roztworu blokującego przenikanie, przepuszczalnie komórki i blokując niespecyficzne miejsca wiązania.
Zanurz sekcję w pierwszorzędowym koktajlu przeciwciał, aby uzyskać jednolite znakowanie przeciwciał, zwane barwieniem swobodnie pływającym.
Przeciwciała wnikają do neuronów i wiążą się z agregatami alfa-synukleiny rozmieszczonymi wzdłuż aksonów – zagregowaną formą charakterystyczną dla chorób neurodegeneracyjnych – i hydrolazami karboksylowymi.
Wprowadź przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Potraktuj fluorescencyjnym barwnikiem wiążącym DNA, który barwi jądro.
Umieść chusteczkę na szkiełku podstawowym, nałóż podłoże montażowe i uszczelnij szkiełkiem nakrywkowym.
Pod mikroskopem konfokalnym fluorescencja obu przeciwciał ujawnia obecność agregatów alfa-synukleiny wzdłuż aksonów neuronów skórnych.
Na początek napełnij niektóre dołki św
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych