Oparte na macierzy peptydowej wykrywanie alloprzeciwciał HLA przeciwko dawcy u biorców narządów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:15 min. • July 8th, 2025
Weźmy macierz peptydową pochodzącą z ludzkiego antygenu leukocytarnego dawcy narządu lub sekwencji HLA zawierającej różne peptydy na błonie celulozowej.
Każdy peptyd niesie ze sobą co najmniej jedną niezgodność aminokwasów między sekwencją HLA dawcy i biorcy, co stanowi potencjalny epitop do odrzucenia narządu za pośrednictwem przeciwciał.
Leczyć buforem blokującym, aby zapobiec niespecyficznej interakcji przeciwciał.
Dodać surowicę biorcy pobraną po przeszczepieniu narządu, zawierającą alloprzeciwciała.
Przeciwciała te, utworzone przeciwko HLA dawcy, wiążą się z docelowym epitopem.
Dodaj przeciwciało drugorzędowe sprzężone z peroksydazą, które wiąże się z alloprzeciwciałem.
Dodaj podłoże chemiluminescencyjne i nadtlenek wodoru. Peroksydaza wykorzystuje nadtlenek wodoru do utleniania podłoża, emitując światło.
Zeskanuj membranę, aby uzyskać obraz.
Dodaj bufor, aby usunąć związane przeciwciała. Przeprowadzić badanie surowicą biorcy przed przeszczepem i uzyskać obraz.
W porównaniu z obrazem sprzed przeszczepu, ciemne plamy na obrazie po przeszczepie wskazują na specyficzne dla dawcy epitopy HLA, które pobudzają reaktywność alloprzeciwciał.
Po zsyntetyzowaniu macierzy zablokuj błony 2
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych