JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:57 min. • July 8th, 2025
Umieść naczynie hodowlane z dekorionowanymi zarodkami danio pręgowanego osadzonymi w agarozie na stoliku mikroskopowym.
Weź roztwór barwnika zawierający niskie stężenie koniugatów przeciwciał, zawierający przeciwciało znakowane czerwoną fluorescencją i przeciwciało anty-DeltaD.
Wstrzyknąć roztwór barwnika do tylnej komory mózgu zarodka, celując w aktywnie dzielące się promieniste komórki progenitorowe gleju lub RGP.
Uwolnij osadzony zarodek i odzyskaj go w pożywce bogatej w składniki odżywcze.
Podczas odzyskiwania koniugaty fluorescencyjne oddziałują z kilkoma cząsteczkami liganda DeltaD liganda Notch na RGP, inicjując internalizację i tworzenie endosomów.
Niskie stężenie koniugatu pozwala niezwiązanym ligandom DeltaD na interakcję z receptorem Notch, aktywując szlak sygnałowy Notch w RGP.
Po wyzdrowieniu przenieś znieczulony zarodek z agarozą do szklanego naczynia grzbietową stroną skierowaną w dół w celu obrazowania.
Wykonaj obrazowanie fluorescencyjne poklatkowe, aby uchwycić podział komórki, który pokazuje asymetryczny podział endosomów fluorescencyjnych zawierających DeltaD na dwie komórki potomne, potwierdzając aktywację sygnalizacji Notch / DeltaD.
Umieść osadzone zarodki po
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych